熒光檢測(cè)器簡(jiǎn)介

　　熒光檢測(cè)器是高壓液相色譜儀常用的一種檢測(cè)器。靈敏度在目前常用的HPLC檢測(cè)器中最高，在HPLC中應(yīng)用較多。它用于能激發(fā)熒光的化合物，極高靈敏度和良好選擇性是它最大的優(yōu)點(diǎn)，因而在某些領(lǐng)域如藥物和生化分析中起著不可替代的作用。

　　熒光檢測(cè)器工作原理

　　熒光檢測(cè)器的工作原理是：用紫外光照射某些化合物時(shí)它們可受激發(fā)而發(fā)出熒光，測(cè)定發(fā)出的熒光能量即可定量。

　　很多與生命科學(xué)有關(guān)的物質(zhì)，如氨基酸、胺類、維生素、甾族化合物及某些代謝藥物都可以用熒光法檢測(cè)。熒光檢測(cè)器在生物樣品痕量分析中很有用，尤其在用熒光衍生劑后，可以檢測(cè)很微量的氨基酸和肽。

　　熒光檢測(cè)器特點(diǎn)

　　1、靈敏度極高

　　熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器的靈敏度約高兩個(gè)數(shù)量級(jí)，最小檢測(cè)量可達(dá)10^（-13g）。這是因?yàn)樵谧贤馕諜z測(cè)法中，被檢測(cè)的信號(hào)A=lg（Io/I），即當(dāng)樣品濃度很低時(shí)，檢測(cè)器所檢測(cè)的是兩個(gè)較大信號(hào)Io及I的微小差別；而在熒光檢測(cè)法中，被檢測(cè)的是疊加在很小背景上的熒光強(qiáng)度。熒光檢測(cè)器是最靈敏的液相色譜檢測(cè)器，特別適合于痕量分析。愈是常用的衡量檢測(cè)器靈敏度的基準(zhǔn)物質(zhì)。另外，熒光檢測(cè)器的靈敏度還可以用水的拉曼譜帶的信噪比來(lái)衡量。

　　2、良好的選擇性

　　產(chǎn)生熒光的一個(gè)必要條件是該物質(zhì)的分子具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶，即物質(zhì)分子具有一定的吸收結(jié)構(gòu)；另外的條件是吸收了激發(fā)光能量之后的分子具有高的熒光效率。相對(duì)較少的分子具有大的足夠檢測(cè)的量子效率是熒光檢測(cè)器高選擇性的主要原因。在很多情況下，熒光檢測(cè)器的高選擇性能夠避免不發(fā)熒光的成分的干擾，成為熒光檢測(cè)的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)。圖4-5-12， 中雖然紫外# 可見(jiàn)光檢測(cè)器在265nm可以檢測(cè)牛奶中的維生素B2，但卻取激發(fā)波長(zhǎng)265nm，發(fā)射波長(zhǎng)520nm做熒光檢測(cè)。因?yàn)榛w成分在此條件下不存在干擾熒光，具有更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果。

　　3、線性范圍較寬

　　線性范圍約！$* 6 ！$+，雖然比紫外吸收檢測(cè)器窄，但對(duì)大多數(shù)痕量分析，該線性范圍已足夠?qū)?。在分析物質(zhì)濃度較大時(shí)，發(fā)射強(qiáng)度由于內(nèi)濾效應(yīng)可能隨濃度增加而降低。

　　4、受外界條件的影響較小

　　5、只要選作流動(dòng)相的溶劑不會(huì)發(fā)射熒光，熒光檢測(cè)器就能適用于梯度洗脫。

　　其中，熒光檢測(cè)器的極高靈敏度和良好選擇性是它最大的優(yōu)點(diǎn)，因而在某些領(lǐng)域如藥物和生化分析中起著不可替代的作用。

　　熒光檢測(cè)器的優(yōu)缺點(diǎn)

　　優(yōu)點(diǎn)：

　　①靈敏度極高。熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器的靈敏度約高兩個(gè)數(shù)量級(jí)，最小檢測(cè)量可達(dá)10^（-13g）。這是因?yàn)樵谧贤馕諜z測(cè)法中，被檢測(cè)的信號(hào)A=lg（Io/I），即當(dāng)樣品濃度很低時(shí)，檢測(cè)器所檢測(cè)的是兩個(gè)較大信號(hào)Io及I的微小差別；而在熒光檢測(cè)法中，被檢測(cè)的是疊加在很小背景上的熒光強(qiáng)度。熒光檢測(cè)器是最靈敏的液相色譜檢測(cè)器，特別適合于痕量分析。愈是常用的衡量檢測(cè)器靈敏度的基準(zhǔn)物質(zhì)。另外，熒光檢測(cè)器的靈敏度還可以用水的拉曼譜帶的信噪比來(lái)衡量。

　　②良好的選擇性。產(chǎn)生熒光的一個(gè)必要條件是該物質(zhì)的分子具有能吸收激發(fā)光能量的吸收帶，即物質(zhì)分子具有一定的吸收結(jié)構(gòu)；另外的條件是吸收了激發(fā)光能量之后的分子具有高的熒光效率。相對(duì)較少的分子具有大的足夠檢測(cè)的量子效率是熒光檢測(cè)器高選擇性的主要原因。在很多情況下，熒光檢測(cè)器的高選擇性能夠避免不發(fā)熒光的成分的干擾，成為熒光檢測(cè)的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)。

　?、劬€性范圍較寬。雖然比紫外吸收檢測(cè)器窄，但對(duì)大多數(shù)痕量分析，該線性范圍已足夠?qū)?。在分析物質(zhì)濃度較大時(shí)，發(fā)射強(qiáng)度由于內(nèi)濾效應(yīng)可能隨濃度增加而降低。

　　④受外界條件的影響較小。

　?、葜灰x作流動(dòng)相的溶劑不會(huì)發(fā)射熒光，熒光檢測(cè)器就能適用于梯度洗脫。

　　缺點(diǎn)：

　?、贌晒鈾z測(cè)器的高選擇性優(yōu)點(diǎn)在一些情況下，也是該檢測(cè)器的缺點(diǎn)。因?yàn)椴皇撬械幕衔镌谶x擇的條件下都能發(fā)生熒光，所以熒光檢測(cè)器不屬于通用型檢測(cè)器，與紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器相比，應(yīng)用范圍較窄。

　　②對(duì)通常發(fā)生在熒光測(cè)量中的一些干擾非常敏感，如背景熒光和猝滅效應(yīng)等。雖然這些干擾在液相分析中不經(jīng)常遇到，但在進(jìn)行定量分析時(shí)，有必要驗(yàn)證這些干擾是否存在，以及對(duì)樣品測(cè)定的影響程度。尤其對(duì)某些物質(zhì)，如鹵素離子、重金屬離子、氧分子及硝基化合物等，都應(yīng)予以特別注意。

　　熒光檢測(cè)器的應(yīng)用

　　1、用于食品工業(yè)、化妝品制造業(yè)、醫(yī)療單位衛(wèi)生監(jiān)測(cè)。

　　2、配合專用試劑，可對(duì)測(cè)液體、固體食品、表面等微生物總數(shù)做快速評(píng)估。

　　熒光檢測(cè)器的使用

　　1、將熒光劑按一定比例加入到系統(tǒng)內(nèi)，加入熒光劑后向系統(tǒng)內(nèi)補(bǔ)充適量的冷媒以便把熒光劑安全推入系統(tǒng)內(nèi)。

　　2、系統(tǒng)運(yùn)行20分鐘以后便可戴上專用眼鏡，用檢漏儀照射系統(tǒng)的外部，泄漏點(diǎn)呈明亮的黃色。

　　3、如漏點(diǎn)極小，建議你隔一天用紫光燈仔細(xì)檢查系統(tǒng)管路。

　　4、如果有些地方看不到，你可以用一個(gè)反光鏡，放在要檢查的地方，用紫光燈照射反光鏡，就可以看到隱蔽地方是否泄漏，也可以用一塊干凈的抹布擦一下懷疑泄漏的地方，然后用紫光燈照射抹布看是否有熒光劑存在。

　　5、復(fù)檢時(shí)應(yīng)注意：維修好滲漏點(diǎn)，應(yīng)清洗殘留在系統(tǒng)外部的熒光劑，運(yùn)行系統(tǒng)后，用熒光燈檢查已維修部位，以確保滲漏已經(jīng)修好。