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什么是分光光度計(jì)
分光光度計(jì)是用不連續(xù)的波長(zhǎng)采樣反射物體或透射物體的一種測(cè)量?jī)x器。由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同，對(duì)不同波長(zhǎng)光線的吸收能力也不同，因此，每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長(zhǎng)的混合光中，將每一種單色光分離出來(lái)，并測(cè)量其強(qiáng)度的儀器叫做分光光度計(jì)。
分光光度法是比色法的發(fā)展。比色法只限于在可見(jiàn)光區(qū)，分光光度法則可以擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。分光光度法則要求近于真正單色光，其光譜帶寬最大不超過(guò)3－5nm，在紫外區(qū)可到1nm以下，來(lái)自棱鏡或光柵，具有較高的精度。分光光度計(jì)？就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。分光光度計(jì)可分為紫外分光光度計(jì)、可見(jiàn)光分光光度計(jì)（或比色計(jì)）、紅外分光光度計(jì)或原子吸收分光光度計(jì)。
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分光光度計(jì)組成
分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長(zhǎng)濃度的定量。儀器主要由光源、單色器、樣品室、檢測(cè)器、信號(hào)處理器和顯示與存儲(chǔ)系統(tǒng)組成。
分光光度計(jì)特點(diǎn)
獨(dú)特的雙光路、雙光束光學(xué)系統(tǒng)，儀器分辨率更高，雜散光更低，穩(wěn)定性、可靠性更強(qiáng)，分析更加準(zhǔn)確；
采用320*240位點(diǎn)陣式高亮6 ”液晶顯示器，顯示清晰，信息完備；
獨(dú)特的長(zhǎng)光程光路設(shè)計(jì)，使儀器分辨率更高，尤其適合微量測(cè)試 強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，使測(cè)試結(jié)果能得到充分的應(yīng)用，用戶編輯更為簡(jiǎn)單快捷；
采用懸架式光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計(jì)，整體光路獨(dú)立固定在16mm厚的鋁制無(wú)變形基座上，底板的變形和外界的震動(dòng)對(duì)光學(xué)系統(tǒng)不產(chǎn)生任何影響，從而大大提高了儀器的穩(wěn)定性和可靠性；
采用同步正弦機(jī)構(gòu)，波長(zhǎng)準(zhǔn)確度高，重復(fù)性好；
采用ARM系統(tǒng)；
0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六檔光譜帶寬自動(dòng)可選，滿足不同用戶的測(cè)量需求；
24位高速、高精度A/D轉(zhuǎn)換，儀器精度更高、反應(yīng)速度更快；
主要元件采用進(jìn)口配置，使儀器雜散光更低、穩(wěn)定性、可靠性更強(qiáng)；
功能更加強(qiáng)大，主機(jī)可獨(dú)立完成光度測(cè)量、定量測(cè)量、光譜掃描、動(dòng)力學(xué)、DNA/蛋白質(zhì)測(cè)試，多波長(zhǎng)測(cè)試及數(shù)據(jù)打印等功能；
充分考慮不同用戶的使用習(xí)慣，本系列儀器都標(biāo)配元析公司光譜掃描軟件，聯(lián)機(jī)操作時(shí)，除能實(shí)現(xiàn)主機(jī)的所有測(cè)試功能外，還可實(shí)現(xiàn)更為強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，并且使數(shù)據(jù)存儲(chǔ)達(dá)到無(wú)限。
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分光光度計(jì)原理
分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比，其關(guān)系如下式：
A=-lg（I/I0）=-lgT=kLc
式中：A為吸光度；
I0為入射的單色光強(qiáng)度；
I為透射的單色光強(qiáng)度；
T為物質(zhì)的透射率；k為摩爾吸收系數(shù)；
L為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長(zhǎng)；
c為物質(zhì)的濃度；
物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收波長(zhǎng)，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后可用同樣條件將該供試品配成溶液，測(cè)定其吸收度，即可由上式計(jì)算出供試品中該物質(zhì)的含量。在可見(jiàn)光區(qū)，除某些物質(zhì)對(duì)光有吸收外，很多物質(zhì)本身并沒(méi)有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經(jīng)過(guò)處理使其顯色后再測(cè)定，故又稱比色分析。由于顯色時(shí)影響呈色深淺的因素較多，且常使用單色光純度較差的儀器，故測(cè)定時(shí)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌吠瑫r(shí)操作。
紫外分光光度計(jì)能用來(lái)測(cè)什么
分光光度計(jì)是食品廠、飲用水廠辦理QS、HACCP認(rèn)證的必備檢驗(yàn)設(shè)備。紫外吸收光譜分析主要用于已知物質(zhì)的定量分析和純度分析。
1）測(cè)定溶液中物質(zhì)的含量
測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度已知的溶液）和未知液（濃度待測(cè)定的溶液）的吸光度，進(jìn)行比較，由于所用吸收池的厚度是一樣的。也可以先測(cè)出不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，在選定的濃度范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該是一條直線，然后測(cè)定出未知液的吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到其相對(duì)應(yīng)的濃度。
2）用紫外光譜鑒定化合物
用各種波長(zhǎng)不同的單色光分別通過(guò)某一濃度的溶液，測(cè)定此溶液對(duì)每一種單色光的吸光度，然后以波長(zhǎng)為橫座標(biāo)，以吸光度為縱座標(biāo)繪制吸光度──波長(zhǎng)曲線，此曲線即吸收光譜曲線。各種物質(zhì)有它自己一定的吸收光譜曲線，因此用吸收光譜曲線圖可以進(jìn)行物質(zhì)種類的鑒定。紫外吸收光譜比較簡(jiǎn)單，同一種物質(zhì)的紫外吸收光譜應(yīng)完全。
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分光光度計(jì)指標(biāo)
型號(hào)UV-9000波長(zhǎng)范圍190-900nm；光譜帶寬0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0nm六檔可選波長(zhǎng)，準(zhǔn)確度±0.1nm（D2 656.1nm）、 ±0.3nm；全區(qū)域波長(zhǎng)重復(fù)性≤0.1nm。
光度準(zhǔn)確度：±0.2%T
光度重復(fù)性：≤0.1%T
雜散光：≤0.01%T
穩(wěn)定性：±0.0004A/h（500nm處）
基線平直度：±0.001A
噪聲水平： ±0.0004A/h
光度范圍：0-200%T
重量：30kg
技術(shù)參數(shù)：
波長(zhǎng)范圍：320∽1000nm
光譜帶寬：4nm
雜散光：≤0.5%（在360nm處）
波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：優(yōu)于±2nm
透射比準(zhǔn)確度：≤±1nmT
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分光光度計(jì)的用途
（1）可見(jiàn)分光光度計(jì)
用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光（400～760nm）的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器，稱為可見(jiàn)分光光度計(jì)?？稍?00nm測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。
（2）紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)
紫外可見(jiàn)光譜儀用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見(jiàn)光或紫外光（200～760nm）的吸光度并進(jìn)行定量分析的儀器?？梢詼y(cè)定核酸和蛋白的濃度，也可以測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。
紫外分光光度計(jì)又可分為單光束，假雙光束，雙光束。它們的用途又有區(qū)別。
單光束：適于在給定波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測(cè)器具有很高的穩(wěn)定性。 雙光束：自動(dòng)記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測(cè)器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結(jié)構(gòu)分析。儀器復(fù)雜，價(jià)格較高。
假雙光束也就是比例雙光束，它的原理是由同一單色器發(fā)出的光被分成兩束，一束直接到達(dá)檢測(cè)器，另一束通過(guò)樣品后到達(dá)另一個(gè)檢測(cè)器。這種儀器的優(yōu)點(diǎn)是可以監(jiān)測(cè)光源變化帶來(lái)的誤差，但是并不能消除參比造成的影響。
（3）紅外分光光度計(jì)
一般的紅外光譜是指大于760nm的紅外光譜，這是研究有機(jī)化合物最常用的光譜區(qū)域，能分析各種狀態(tài)（氣、液、固）的試樣。 紅外光譜法的特點(diǎn)是：快速、樣品量少（幾微克-幾毫克），特征性強(qiáng)（各種物質(zhì)有其特定的紅外光譜圖）、能分析各種狀態(tài)（氣、液、固）的試樣以及不破壞樣品。
（4）熒光分光光度計(jì)
熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。應(yīng)用于科研、化工、醫(yī)藥、生化、環(huán)保以及臨床檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域。
通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定， 不但可以做一般的定量分析， 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化，從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。
（5）原子吸收分光光度計(jì)
該法主要適用樣品中微量及痕量組分分析常規(guī)儀器之一。是材料分析及質(zhì)量控制部門進(jìn)行常量、微量金屬（半金屬）元素分析的有力工具。
分光光度計(jì)注意事項(xiàng)
（1）分光光度計(jì)應(yīng)放在干燥的房間內(nèi)，使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)。熱天時(shí)不能用電扇直接向儀器吹風(fēng)，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。
（2）分光光度計(jì)使用前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應(yīng)該對(duì)儀器的安全性能進(jìn)行檢查，電源接線應(yīng)牢固，通電也要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再按通電源開(kāi)關(guān)。
（3）分光光度計(jì)在儀器尚未接通電源時(shí)，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進(jìn)行調(diào)節(jié)。
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