圖1.基于圖像的干涉焦點感應(yīng)(IBIFS)方法原理圖

自適應(yīng)光學(xué)是一種通過校正波前畸變來提升成像質(zhì)量的技術(shù)。干涉焦點感應(yīng)(IFS)作為自適應(yīng)光學(xué)領(lǐng)域近年提出的新方法，在深層組織成像中校正復(fù)雜像差方面已證明具有顯著效果。該技術(shù)基于樣本內(nèi)單個位置的測量來確定校正模式。

本文提出了一種基于圖像的干涉焦點感應(yīng)方法(IBIFS)，通過共軛自適應(yīng)光學(xué)配置，利用圖像質(zhì)量指標(biāo)的反饋信息對整個視場范圍內(nèi)的波前進行漸進式估計與校正。樣本共軛配置通過逐點測量各位置校正模式，實現(xiàn)了全視場范圍內(nèi)多個點位的同步校正。我們在自主搭建的雙光子顯微鏡系統(tǒng)上，分別以熒光微球和小鼠腦切片為樣本對方法進行了實驗驗證。結(jié)果表明，與基于感興趣區(qū)域的方法相比，本方法不僅具有更大的有效視場范圍，還能獲得更為穩(wěn)定的優(yōu)化效果。

近日，中科院西安光機所超快光科學(xué)與技術(shù)全國重點實驗室姚保利研究員團隊在大視場雙光子散射顯微成像領(lǐng)域取得進展，相關(guān)研究成果發(fā)表在《納米光子學(xué)》(Nanophotonics)上Nanophotonics。

目前雙光子顯微成像領(lǐng)域最常見的AO方法是Zernike模式分解法，該方法對于較弱的像差補償效果較好，但受光學(xué)記憶效應(yīng)范圍的限制，校正相位僅僅對于一個小區(qū)域視場有較好的效果。

針對上述問題，研究團隊提出了一種針對深層組織顯微成像的大視場波前校正方法——基于圖像的干涉焦點感應(yīng)波前校正方法(圖1)。該方法利用全視場圖像信息評估參數(shù)作為干涉焦點感應(yīng)方法的輸入，獲得了更穩(wěn)定校正效果的同時，展現(xiàn)出高穩(wěn)定、抗干擾的特點。

在共振掃描振鏡雙光子激發(fā)熒光顯微成像系統(tǒng)中，研究人員首先對散射體下的熒光小球樣品進行了大視場波前校正(圖2)，實驗結(jié)果表明，基于小區(qū)域信號校正的方法(ROI-based)僅對參考點B1附近的視場有較好的校正效果，而IBIFS方法(MHF-based)可以利用全視場的圖像信息反饋調(diào)節(jié)校正相位，具有全視場的校正效果。

圖2.熒光小球樣品的散射校正實驗結(jié)果

在小鼠腦神經(jīng)切片樣品散射校正實驗中，實驗結(jié)果(圖3)顯示ROI-based的校正效果依賴于參考區(qū)域的樣品結(jié)構(gòu)分布，局部優(yōu)化效果較好而全局優(yōu)化效果較差。而IBIFS方法校正后的圖像總強度增強倍數(shù)比基于小區(qū)域信號的方法高37%，實現(xiàn)了更穩(wěn)定的大視場校正。該技術(shù)可應(yīng)用于高速共振掃描雙光子顯微鏡，為腦科學(xué)、發(fā)育生物學(xué)等領(lǐng)域提供增強顯微成像工具。

圖3.小鼠大腦切片樣品的散射校正實驗結(jié)果

研究受到國家自然科學(xué)基金委員會國家重大科研儀器研制項目、國家重點研發(fā)計劃、陜西省重點產(chǎn)業(yè)鏈等項目的支持。

論文第一作者為西安光機所2021級博士研究生楊睿文，通訊作者為姚保利研究員和楊延龍正高級實驗師，西安光機所是第一完成單位和通訊單位。

審核編輯 黃宇