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      Prominence nano 納升液相色譜儀

      領拓儀器 ? 來源：領拓儀器 ? 2020-04-26 11:20 ? 次閱讀
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      Prominence nano 納升液相色譜儀
      Prominence nano系列是一套納升LC系統(tǒng)，可在納升流量下進行精準流速的溶劑輸送。按照應用不同，可以配置成1D和2D系統(tǒng)。
      Prominence nano具備納升流速下的高保留時間重復性，非常低的系統(tǒng)死體積和極低的交叉污染等特點。

      Nano-Assist一維LC設置圖

      應用

      高保留時間重復性

      蛋白質組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異，而樣本中又存在許多特征相似的多肽，對保留時間的重復性要求非常高。Prominence nano系統(tǒng)的高重復性可保證蛋白質組分析的高精數據，配置了RFC系統(tǒng)的LC-20AD nano可以在流速為300 nL/min獲得RSD不超過0.2% 的保留時間重復性。


      牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的重復性

      2維 LC的高分辨率


      牛血清白蛋白（BSA）酶解樣品的重復性

      在蛋白質組學分析時，單一的1D反相分離不足以提供足夠的色譜峰容量；所以，為了實現復雜樣品的分離，需要進行2D分離以保證足夠的峰容量。Prominence nano系統(tǒng)可以進行2D分析，結合陽離子交換和反相模式，為蛋白質組學分析提供所需的核心技術。下圖為200fmol酵母蛋白質的分析圖，1D分離中的未分離組分在2D中繼續(xù)分離成幾個組分，2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果。

      分析條件

      1維

      柱 PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.)
      流動相 甲酸銨緩沖液
      濃度STEP梯度
      流速 40 nL/min
      捕集柱 (5 mmL.×300 ?m I.D.)
      L-column （micro）
      捕集時長 5分鐘
      脫鹽溶劑 水/蟻酸=100/0.1
      脫鹽流速 L/min
      脫鹽時長 5分鐘

      2維

      柱 PicoFrit (100 mmL.×75 ?m I.D.)
      流動相 梯度洗脫
      A)水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)
      流速 600nL/min
      溫度 溫度
      檢測 LCMS-IT-TOF
      樣本 酵母蛋白中的蛋白
      （相當于200 fmol的）

      分別利用1維和2維中不同類型的柱體進行其他組合的分離模式也是可行的。在這種情況下，分離或檢測方法由于使用的移動相分離模式或類型之間的相互作用，可能會有一些限制。

      連接MALDI-TOFMS使用

      Prominence nano系統(tǒng)不僅僅可以通過nano ESI接口連接LCMS使用，還可連接到配有自動點靶儀的MALDI-TOFMS儀器。為了準確分析MALDI靶的每個色譜峰，需要LC能夠在1nL到1μL范圍之內精確控制流速，Prominence nano系統(tǒng)的完全滿足了此需要。


      酶解BSA樣品的UV色譜圖（500fmol）

      分析條件

      檢測器 UV220 nm
      柱 MonoCap for Fast-flow 快速MonoCap
      (250 mmL. × 100 μm I.D.)
      流動相 1、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)
      2、梯度洗脫
      流速 1 μL/min
      溫度 環(huán)境溫度
      捕捉柱 ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.)
      點靶間隔 12 秒的點斷
      每點液體：200nL（不包括基質）
      lw
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